Tales Bernardes / Tecnologia no Campo
A transferência de embriões é um passo no processo de remover um ou mais embriões do trato reprodutivo de uma fêmea doadora e transferi-los para uma ou mais fêmeas receptoras.
Os embriões também podem ser produzidos no laboratório por meio de técnicas como a fertilização in vitro ou a clonagem de células somáticas.
Mas a transferência real de um embrião é apenas um passo em uma série de processos que podem incluir alguns ou todos os seguintes:
- Superovulação e inseminação de doadores
- Coleção de embriões.
- Isolamento.
- Avaliação.
- Armazenamento a curto prazo de embriões.
- Micromanipulação.
- Testes genéticos de embriões.
- Congelamento de embriões.
- Transferência de embriões.
Etapas para a transferência de embriões no gado
Praticamente todas as transferências comerciais de embriões usam a recuperação não cirúrgica dos embriões, em vez de técnicas cirúrgicas. O processo envolve várias etapas e um tempo considerável, além de despesas variáveis.
1) Seleção da vaca doadora
O primeiro passo é selecionar uma vaca doadora. Os produtores de carne bovina terão opiniões diferentes sobre os critérios para selecionar uma vaca com genética excelente.
Se os critérios são registros de desempenho, deve-se considerar o valor potencial em reais de seus bezerros.
Pois, há uma despesa considerável incorrida em uma gravidez transcorrida com sucesso. Portanto, o valor de venda do bezerro recém-nascido deve ser alto o suficiente para justificar a despesa do procedimento de transferência de embriões.
Como o gado leiteiro é selecionado mais rotineiramente em uma característica (produção de leite), as decisões relativas às vacas doadoras são menos complicadas.
No entanto, considerações econômicas são igualmente importantes. A transferência de embriões não é uma “fórmula mágica”. Não torna o gado médio bom ou um bom gado melhor.
É adequado para um número limitado de produtores de gado de corte ou gado leiteiro que podem ser “melhoradores” de raças para uma ou mais características economicamente importantes.
A vaca deve ter um trato reprodutivo normal e um histórico de pós-parto sem problemas. Especialmente em relação ao comprimento do estro, de 18 a 24 dias, devem livre de vaginites e infecções uterinas.
Tanto bovinos de corte quanto leiteiros devem estar pelo menos nos 60 dias do após o parto antes do início do procedimento de transferência.
Tem sido sugerido que potenciais vacas doadoras em programas de transferência de embriões sejam selecionadas com base nos seguintes critérios:
- Ciclos regulares, começando em uma idade jovem.
- Uma história de não mais do que duas criações por concepção.
- Bezerros anteriores com intervalos de aproximadamente 365 dias.
- Sem dificuldades de parto ou irregularidades reprodutivas.
- Sem defeitos genéticos conformacionais ou detectáveis.
Tanto a vaca muito obesa quanto a vaca magra terão a fertilidade reduzida. Por isso é importante que o doador esteja em uma condição corporal adequada no momento da transferência do embrião.
2) Superovulação da Vaca Doadora para transferência de embriões
A superovulação da vaca doadora é o próximo passo no processo de transferência de embriões. Superovulação é a liberação de múltiplos óvulos em um único estro.
Vacas ou novilhas tratadas adequadamente podem liberar até dez ou mais óvulos viáveis em um estro. Aproximadamente 85% de todos os doadores férteis normais responderão ao tratamento de superovulação com uma média de cinco embriões transferíveis.
Algumas vacas que são repetidamente superovuladas em intervalos de 60 dias podem produzir um número menor de óvulos ao longo do tempo.
O princípio básico da superovulação é estimular um extenso desenvolvimento folicular através do uso do hormônio folículo-estimulante (FSH).
Os protocolos de superovulação podem diferir entre os técnicos. Mas geralmente as preparações de FSH são injetadas duas vezes ao dia, por quatro dias, no meio ou perto do final de um ciclo estral, enquanto um corpo lúteo funcional (CL) está no ovário.
Uma injeção de prostaglandina administrada no quarto dia do esquema fará com que haja regressão do CL e o estro ocorra aproximadamente 48 horas depois.
3) Inseminação da Vaca
Devido à liberação de múltiplos óvulos, há uma necessidade maior de células espermáticas viáveis para alcançar os ovidutos das fêmeas superovuladas. Portanto, muitos técnicos optarão por inseminar a vaca várias vezes durante e após o estro.
Um esquema é inseminar a vaca superovulada às 12, 24 e 36 horas após o início do estro. O uso de sêmen de alta qualidade com uma alta porcentagem de células móveis, normais, é um passo crítico em qualquer programa de transferência de embriões.
O local correto para colocação de sêmen é no corpo do útero. Este é um alvo pequeno (1/2 a 1 polegada) apenas na frente do colo do útero.
4) Liberando os Embriões
Para coletar os embriões não cirurgicamente, por meio de uma lavagem interna do útero com uma solução apropriada por meio de um cateter introduzido através da cérvix para coletar os embriões sete dias após a inseminação artificial.
Este procedimento de coleta é relativamente simples e pode ser concluído em 30 minutos ou menos, sem causar danos à vaca.
Um estilete esterilizado é colocado no lúmen do cateter para oferecer rigidez para a passagem através do colo do útero para o interior do corpo uterino.
Quando a ponta do cateter está no corpo do útero, o manguito é preenchido lentamente com aproximadamente 2 mL de solução salina normal.
O cateter é então gentilmente puxado para que o manguito fique assentado no orifício interno do colo do útero. Uma solução salina adicional é então adicionada ao manguito para selar completamente o orifício interno do colo do útero.
O útero é finalmente preenchido. Um litro de fluido é usado por doadora. Muitos técnicos usam um volume menor e irrigam um corno uterino de cada vez.
Cada corno uterino é preenchido e esvaziado cinco a dez vezes com 30 a 200 ml de líquido de cada vez, de acordo com o tamanho do útero. Os embriões são lavados com esse fluido e coletados em um filtro com o fluido.
Os poros no filtro são menores que os embriões, então o excesso de fluido é drenado do filtro sem perder os embriões. Embriões são separados no compartimento de flush e examinados sob um microscópio para determinar sua qualidade e estágio de desenvolvimento.
5) Avaliação dos Embriões
Como os embriões individuais são localizados usando um microscópio, eles são avaliados quanto à sua qualidade e classificados numericamente quanto à probabilidade potencial de sucesso se transferidos para uma fêmea receptora.
Os principais critérios para avaliação incluem:
- Regularidade de forma do embrião.
- Compacidade dos blastômeros (as células em divisão dentro dos limites do embrião).
- Variação no tamanho da célula.
- Cor e textura do citoplasma (o fluido dentro da parede celular).
- Diâmetro total do embrião.
- Presença de células extrusadas.
- A regularidade da zona pelúcida (a camada protetora de proteínas e polissacarídeos ao redor do embrião unicelular).
- Presença de vesículas (estruturas semelhantes a bolhas no citoplasma).
Embriões são classificados de acordo com estes critérios subjetivos como:
- Grau 1: excelente ou bom
- Grau 2: Justo
- Grau 3: pobre
- Grau 4: Morto ou degenerando
Os embriões também são avaliados quanto ao seu estágio de desenvolvimento sem considerar a qualidade.
Essas etapas também são numeradas:
- Estágio 1: não fertilizado
- Estágio 2: 2 a 12 células
- Fase 3: Mórula Precoce
- Estágio 4: Mórula
- Estágio 5: Blastocisto precoce
- Estágio 6: Blastocisto
- Estágio 7: blastocisto expandido
- Estágio 8: Blastocisto eclodido
- Etapa 9: Expansão do blastocisto eclodido
Não há aparentemente nenhuma diferença nas taxas de prenhez de células fertilizadas em diferentes estágios de desenvolvimento. Isso se assumirmos que elas sejam transferidas para a fêmea receptora no estágio apropriado do ciclo estral.
Estágios 4, 5 e 6 embriões suportam os procedimentos de congelamento e descongelamento com a maior viabilidade. A qualidade do embrião também é de extrema importância na sobrevivência do estresse de congelamento e descongelamento.
Embriões de grau 1 geralmente são considerados os únicos a congelar. Os embriões de grau 2 podem ser congelados e descongelados, mas as taxas de gravidez geralmente são reduzidas.
6) Seleção e Preparação das Vacas Receptoras para transferência de embriões
O manejo adequado do rebanho receptor é fundamental para o sucesso da transferência de embriões. Vacas que são reprodutivamente sadias, que exibem facilidade de parto e que têm boa capacidade de ordenha e maternidade, são prospectos de receptoras aptas.
Eles devem estar em um plano adequado de nutrição (escore de condição corporal 6 para vacas de corte e escore de condição corporal 3 a 4). Essas vacas também devem estar em um programa de sanidade adequado.
Estabelecer um número médio para o número de bezerros de transferência de embriões de uma única vaca doadora em um ano é difícil.
Para maximizar a sobrevivência do embrião na fêmea receptora na seguinte transferência, as condições no trato reprodutivo do receptor devem ser as mesmas da doadora. Isso requer a sincronização dos ciclos de estro entre o doador e os receptores.
A sincronização das receptoras pode ser feita de maneira semelhante e no mesmo horário de trabalho das vacas doadoras. Existem vários protocolos diferentes de sincronização de estro com vantagens e desvantagens para cada protocolo.
O ponto crítico em relação à sincronização do receptor de estro de vaca é que o momento deve coincidir com o tempo de inseminação da vaca doadora. De modo que a doadora e as receptoras tenham um ambiente uterino semelhante sete dias depois, quando a transferência ocorre.
A sincronização de produtos é mais eficaz em receptoras que já estão aptas. “Anestro” ou vacas não-ciclistas que são muito magras ou muito pequenas, não serão receptoras úteis.
7) Transferência dos Embriões
A transferência do embrião para a vaca receptora primeiro requer o “carregamento” do embrião em uma palha de inseminação de 1 / 4mL. Isto é feito sob visão microscópica com o auxílio de uma seringa de 1mL e requer considerável prática, paciência e destreza.
Embriões degenerados ou embriões de qualidade muito baixas, não precisam ser carregados e podem ser descartados. Imediatamente antes da transferência do embrião, os ovários do receptor são palpados por via retal para determinar qual ovário ovulou.
Com a ajuda de um assistente para manter aberta a vulva da vaca receptora, a pistola de transferência ou haste de inseminação é cuidadosamente passada pelo colo do útero. A ponta da haste é então permitida deslizar no corno no mesmo lado do ovário com um corpo lúteo ativo. O embrião é gentilmente expelido na ponta anterior do corno uterino.
Grande cuidado é tomado para não causar danos ao revestimento do útero. Tal inflamação e cicatrização reduziria grandemente a probabilidade de a gravidez ser estabelecida.
Embriões devem ser transferidos o mais rapidamente possível após o flush (dentro de 8 horas, pelo menos).
O processo de congelamento
O processo de congelamento e descongelamento também é muito complicado e geralmente resulta em uma redução de aproximadamente 10% a 20% nas taxas de prenhez daquelas observadas com embriões frescos.
Os embriões congelados são uma commodity comercializável e têm sido especialmente úteis nas vendas internacionais da genética bovina e láctea dos Estados Unidos.
Os produtores que acreditam possuir gado com a capacidade genética de serem valiosos em outros países podem entrar em contato com o Departamento de Agricultura do estado e perguntar sobre regulamentações e comercialização de embriões congelados de seu rebanho.
8) Resultados Esperados da transferência de embriões
A produção de embriões varia muito de doador para doador e de descarga para descarga. A produção média é de aproximadamente seis embriões congeláveis (excelentes e bons) e oito embriões transferíveis (excelentes, bons, justos e pobres) por superovulação.
As taxas de gravidez variam de flush a flush com médias frescas de 60 a 70% e congeladas de 50 a 60%. Muitos fatores afetam as taxas de gravidez, como qualidade do embrião, receptores, capacidade técnica e doador.
Alguns doadores consistentemente produzem embriões com taxas de gravidez mais altas do que outros com embriões de grau similar. Este último fator parece ser incontrolável e imprevisível.